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Hypoxyprobe產品Pimonidazole使用注意事項

更新時間:2023-04-08   點擊次數:471次

Pimonidazole是新型的組織細胞缺氧標記物,Hypoxyprobe(HPI)公司擁有硝基咪唑類化合物特異性抗體,該抗體為公司專有技術,在此基礎上Hypoxyprobe公司開發了不同標記的特異性抗體,可用于:利用免疫組織化學,酶聯免疫吸附試驗和流式細胞儀技術分析對腫瘤細胞分析檢測。


Pimonidazole使用注意事項

1. Animal Studies 動物研究

研究正?;蚰[瘤組織缺氧首先通過靜脈注射(intravenous infusion)、腹腔注射(intraperitoneal injection)或口服(oral ingestion)法給Hypoxyprobe-1溶液,劑量為60mg/kg體重。比如,25g小鼠的探針用量為1.5mg/只小鼠。(高達400mg/kg的劑量用于小鼠無可見毒性或引起組織缺氧變化,但60mg/kg以成本給予良好的染色結果)。

給藥后,Hypoxyprobe-1分布到包括大腦的所有組織,且僅僅在氧濃度≤14μM(相當于pO2=10mm Hg,37℃)的細胞內與蛋白質巰基形成加合物。除了腫瘤之外,正常組織如肝臟、腎臟和皮膚含pO2等于或低于10mm Hg的細胞,也會結合Hypoxyprobe-1。

2.Tissue cultures 組織培養

通常情況下,細胞懸液置于含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧環境中孵育1-2h。之后細胞離心涂片、固定、FTIC-MAb1和anti-FITC chromogenic secondary染色。


常見問題解答(FAO)

1.Hypoxyprobe-1 探針如何溶解?

Pimonidazole HCl 是弱堿性鹽酸鹽,水溶性非常好,一般建議溶解于116mg/ml 的中性生理鹽水。

2.Pimonidazole HCl劑量是多少?

對于常規的小動物大小比較均一的,例如:小鼠或大鼠,我們推薦:探針用量:60 mg/kg。從30 mg/kg 到 400 mg/kg在小鼠和大鼠都有用到,在此范圍內的探針用量,不會由于血流效應而導致毒性或氧量的改變。對于體型較大個體,注射劑量依據個體的基礎表面積而定。對于人樣本,推薦劑量為:0.5 mg/m2,狗樣本:0.28 mg/m2

3.Pimonidazole HCl 探針是否能夠滲透進入低氧大腦組織或腦腫瘤組織?

Pimonidazole HCl可以自由滲透進入腦和腦腫瘤組織。

4.探針注射后,多久可以進行收獲組織?

對于人體組織的一些研究表明,收獲組織需要在免疫后15-24小時后檢查。探針在血漿中的半衰期是5小時,因此16-24小時相當于3-5個探針半衰期循環。也就是說:在組織檢查時:大概有1/8 到1/32 的探針仍存在,冷固定后,這樣減少了非特異性染色,且低背景。

另外關于人類腫瘤研究表明,活組織檢查應該在免疫后,1.5-4小時,然后組織及時轉到液氮固定。這種方法背景也較低。小鼠血漿中的探針半衰期在0.25小時。這種情況下,采取1-2小時收獲組織然后采取快速固定方法,可有效的消除背景。

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